CD26 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400862-LAC

Il DPP4 umano codifica CD26, una glicoproteina transmembrana di tipo II con attività dipeptidil-peptidasica che tronca selettivamente alcuni ormoni incretinici, chemochine e neuropeptidi, modellando la segnalazione mediata da peptidi nei tessuti immunitari e metabolici. Oltre al suo ruolo enzimatico, CD26 partecipa alla segnalazione co-stimolatoria nelle cellule T e modula le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice tramite partner di legame quali l’adenosina deaminasi e componenti della matrice extracellulare. DPP4/CD26 interseca vie che regolano infiammazione, chemiotassi e omeostasi del glucosio, e la sua espressione è regolata dinamicamente nei compartimenti epiteliale, endoteliale ed ematopoietico. Un’attività alterata di DPP4 o un’espressione modificata di CD26 sono state associate a disregolazione immunitaria, caratteristiche cardiometaboliche e biologia tumorale, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in studi incentrati sui pathway.

Le particelle di attivazione lentivirale CD26 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DPP4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD26 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DPP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD26. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DPP4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.