CD229 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404895-NIC

LY9はCD229（SLAMF3）をコードしており、CD229はSLAMファミリーに属する免疫調節受容体です。主にリンパ球に発現し、同種分子間（ホモフィリック）相互作用を介して、活性化の閾値、サイトカイン産生、細胞間コミュニケーションの形成に関与します。SAP/SH2D1Aなどのアダプタータンパク質との結合や、下流のSrcファミリーキナーゼによるシグナル伝達を通じて、CD229はT細胞およびB細胞応答の調節に寄与し、免疫シナプスの構築にも影響を与えます。LY9/CD229シグナルの異常は免疫調節異常に関与するとされ、自己免疫様表現型やリンパ系悪性腫瘍の生物学との関連が報告されています。状況に応じて活性化／抑制の両作用を示し得る細胞表面受容体として、CD229はリンパ球の分化、疲弊、抗原受容体シグナルの共刺激（コシグナル）制御に関わる経路で頻繁に研究されています。

CD229 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LY9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LY9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LY9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LY9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。