CD21 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401352-ACT

CR2 codifica per CD21, un recettore del complemento espresso principalmente sulle cellule B e sulle cellule dendritiche follicolari, che lega antigeni opsonizzati con C3d e coopera con CD19 e CD81 per abbassare la soglia di attivazione del segnale del recettore delle cellule B. Attraverso questa funzione di co-recettore, CD21 integra la marcatura da parte del complemento con l’immunità adattativa, modulando l’acquisizione dell’antigene, le reazioni del centro germinativo e le risposte anticorpali. CD21 funge anche da fattore di adesione cellulare per il virus di Epstein–Barr, collegando la biologia di CR2 ai meccanismi coinvolti nell’ingresso virale e nella successiva attivazione immunitaria. Un’attività deregolata di CR2/CD21 è stata associata ad alterazioni dell’immunità umorale e a fenotipi infiammatori rilevanti per l’autoimmunità e per meccanismi patologici guidati dalle cellule B.

CD21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD21. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD21 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD21 nelle cellule tumorali con espressione di CR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.