CD2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402105-ACT

Il CD2 umano codifica un recettore di adesione e segnalazione sulla superficie delle cellule T appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, che si lega a CD58 (LFA-3) per stabilizzare il contatto dipendente dall’antigene tra i linfociti T e le cellule presentanti l’antigene. CD2 partecipa alla formazione della sinapsi immunologica e modula le soglie di segnalazione del TCR, la riorganizzazione del citoscheletro e le vie a valle che determinano attivazione, produzione di citochine e comunicazione cellula-cellula. Attraverso questi ruoli, CD2 influenza lo sviluppo dei linfociti e la funzione effettrice, e un’espressione o una segnalazione alterate di CD2 sono state associate a risposte immunitarie disregolate in contesti infiammatori e autoimmuni, nonché a fenotipi di cellule immunitarie studiati nella ricerca sulle neoplasie ematologiche. CD2 è quindi un nodo utile per analizzare i meccanismi di attivazione delle cellule T, le dinamiche di adesione e le interazioni con il microambiente immunitario.

CD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD2 nelle cellule tumorali con espressione di CD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.