CD1D Plasmide Double Nickase (h): sc-402435-NIC

CD1D codifica per CD1d, una molecola presentatrice dell’antigene non classica, simile alle MHC di classe I, che lega antigeni lipidici self e microbici e li espone sulla superficie cellulare per il riconoscimento da parte delle cellule T natural killer invarianti (iNKT). Attraverso le interazioni CD1d–TCR, coordina l’attivazione di cellule T di tipo innato, il rapido rilascio di citochine e il successivo cross-talk con cellule dendritiche, cellule NK e cellule T convenzionali, modellando la sorveglianza immunitaria e la tolleranza. La funzione di CD1D è integrata con il traffico endosomiale, le vie di caricamento dei lipidi e i processi di presentazione dell’antigene, che influenzano la segnalazione infiammatoria e l’omeostasi immunitaria dei tessuti. Alterazioni nella presentazione di antigeni lipidici mediata da CD1d sono state implicate in una disregolazione immunitaria rilevante per le infezioni, l’immunologia tumorale e condizioni autoimmuni o infiammatorie, motivando studi meccanicistici in diversi tipi cellulari.

CD1D Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD1D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD1D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD1D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD1D interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.