CD155 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424585-ACT

Il gene murino **Pvr** codifica **CD155**, una molecola di adesione della superfamiglia delle immunoglobuline che funge da ligando per **DNAM-1 (CD226)** e anche per recettori inibitori come **TIGIT** e **CD96**, influenzando la formazione della sinapsi immunologica e l’attività dei linfociti citotossici. CD155 sostiene inoltre l’adesione e la motilità cellulare tramite interazioni con la matrice extracellulare e con regolatori del citoscheletro, collegandosi a processi che incidono sul rimodellamento tissutale e sull’infiammazione. Nel sistema nervoso è noto come omologo del recettore del poliovirus e contribuisce alle dinamiche di contatto cellula–cellula. L’espressione deregolata di CD155 è spesso studiata nel contesto dell’immunologia tumorale, delle interazioni virali e dei meccanismi di evasione immunitaria, rendendo **Pvr** un nodo utile per indagare la segnalazione degli immunorecettori e la regolazione del microambiente nei modelli murini.

CD155 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Pvr senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD155 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Pvr nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Pvr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD155. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Pvr nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD155 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD155 nelle cellule tumorali con espressione di Pvr silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.