CD10 Plasmide Double Nickase (h): sc-400856-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD10 Double Nickase Plasmid (h) e il CD10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MME. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD10 Antibody (F-4): sc-46656
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400856-NIC | 20 µg | $410.00 |
MME codifica CD10 (neprilisina), una metalloendopeptidasi di membrana zinco-dipendente che regola il microambiente peptidico extracellulare scindendo diversi substrati bioattivi, tra cui encefaline, peptidi natriuretici e peptidi correlati all’endotelina. Modulando la disponibilità dei ligandi e l’ampiezza della segnalazione recettoriale, CD10 influenza vie legate alla comunicazione cellula-cellula, al tono infiammatorio e al rimodellamento tissutale nei compartimenti epiteliale ed ematopoietico. CD10 è ampiamente utilizzato come marcatore di linea e di differenziamento e il suo stato di espressione viene spesso analizzato in studi sui programmi di sviluppo e sui fenotipi associati ai tumori, in cui un’alterata elaborazione proteolitica può rimodellare la segnalazione del microambiente. La perturbazione funzionale di MME offre un approccio pratico per dissezionare le reti del metabolismo peptidico e le risposte trascrizionali a valle in modelli cellulari umani.
CD10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MME nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MME. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MME. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MME interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.