CBX8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407903-NIC

CBX8（chromobox 8）はポリコーム群（Polycomb group）タンパク質の一つで、カノニカルなポリコーム抑制複合体1（PRC1）におけるクロマチンリーダーとして機能し、抑制性のヒストン修飾マークを認識して転写サイレンシング・プログラムの維持を助けます。PRC1によるクロマチンの凝縮やヒストンのユビキチン化制御を介して、CBX8は発生関連遺伝子、細胞アイデンティティ、ならびに細胞周期に連動した転写状態の安定的な制御に寄与します。CBX8活性の破綻は、複数の疾患コンテキストにおいて、増殖・分化・老化関連経路に影響を与えるエピジェネティックな状態の変化と関連づけられています。転写抑制における役割から、CBX8はポリコーム依存的なクロマチン制御が遺伝子ネットワークをどのように形成するかを調べるうえで有用な標的となります。

CBX8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CBX8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CBX8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CBX8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CBX8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。