caveolin-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400569-ACT

Il gene umano **CAV3** codifica la caveolina-3, una componente strutturale delle caveole arricchita nel muscolo, che organizza i microdomini di membrana e funge da impalcatura per le proteine di segnalazione a livello del sarcolemma. La caveolina-3 influenza la meccanotrasduzione, l’omeostasi lipidica e le vie associate ai recettori modulando la compartimentalizzazione di canali ionici e chinasi coinvolti nell’eccitabilità e nel metabolismo muscolare. Alterazioni dell’espressione di **CAV3** o dell’architettura caveolare sono associate a disfunzioni del muscolo scheletrico e cardiaco, incluse forme di distrofia muscolare e cardiomiopatia, a sostegno della sua rilevanza per la stabilità delle fibre muscolari e le risposte allo stress. Queste proprietà rendono la caveolina-3 un utile punto di accesso per studiare il traffico di membrana, la trasduzione del segnale e la differenziazione delle cellule muscolari in sistemi modello umani.

caveolin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAV3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

caveolin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAV3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAV3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di caveolin-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAV3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da caveolin-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via caveolin-3 nelle cellule tumorali con espressione di CAV3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.