caveolin-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-419479-NIC

Il gene Cav1 del topo codifica caveolina-1, un componente strutturale principale delle caveole che funge da piattaforma di supporto per i microdomini di membrana e coordina la trasduzione del segnale a livello della membrana plasmatica. La caveolina-1 modula l’endocitosi e la meccanotrasduzione, influenza l’omeostasi del colesterolo e il traffico lipidico, e contribuisce a determinare gli output di segnalazione di vie quali le chinasi della famiglia Src, la segnalazione eNOS/NO, TGF-β e la dinamica delle adesioni focali dipendenti dalle integrine. Attraverso questi ruoli, Cav1 incide sul rimodellamento del citoscheletro, sulla migrazione cellulare e sulle interazioni con la matrice extracellulare, aspetti comunemente analizzati in biologia vascolare, nei modelli di fibrosi e negli studi sul microambiente tumorale. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione della caveolina-1 sono state associate a una funzione endoteliale disregolata, a fenotipi adiposi e metabolici e a cambiamenti dipendenti dal contesto nella proliferazione e nell’invasività in ambito oncologico.

caveolin-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cav1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cav1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cav1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cav1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.