caveolin-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400102-NIC

CAV1 codifica la caveolina-1, un componente strutturale principale delle caveole che funge da impalcatura per complessi di segnalazione e organizza microdomini di membrana ricchi di colesterolo. La caveolina-1 modula la segnalazione delle tirosin-chinasi recettoriali, le vie accoppiate alle proteine G, la meccanotrasduzione dipendente dalle integrine e la segnalazione endoteliale dell’ossido nitrico, influenzando endocitosi, omeostasi lipidica e dinamiche del citoscheletro. Attraverso queste funzioni, incide sulla migrazione cellulare, sulla proliferazione e sulle risposte allo stress; alterazioni dell’espressione o della localizzazione di CAV1 sono associate a fenotipi cardiovascolari e metabolici, nonché a programmi di segnalazione legati ai tumori. In quanto organizzatore di membrana, la caveolina-1 è ampiamente utilizzata come marcatore e nodo funzionale per studiare la biologia delle caveole e la trasduzione del segnale prossimale alla membrana.

caveolin-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAV1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAV1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAV1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAV1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.