cathepsin Z Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403244

Panoramica

CTSZ codifica la catepsina Z (catepsina X), una proteasi cisteinica lisosomiale che partecipa al turnover intracellulare delle proteine e alla processazione dei peptidi all’interno del sistema endo-lisosomiale. La catepsina Z può modulare l’adesione e la migrazione cellulare attraverso interazioni che coinvolgono il suo motivo RGD e contribuendo a plasmare reti di proteasi che rimodellano il microambiente extracellulare. La sua attività è collegata alla processazione dell’antigene e alla segnalazione infiammatoria nelle cellule immunitarie, collegando CTSZ a vie che regolano le risposte immunitarie innate e adattative. Un’espressione o un’attività disregolata di CTSZ è stata associata a fenotipi di invasione tumorale e a contesti neuroinfiammatori o neurodegenerativi, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla proteostasi e sui microambienti immunitari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin Z (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CTSZ in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CTSZ insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CTSZ a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cathepsin Z.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CTSZ per lo studio della segnalazione di cathepsin Z, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CTSZ critici per la funzione di cathepsin Z
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CTSZ per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cathepsin Z CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cathepsin Z CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CTSZ. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cathepsin Z Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cathepsin Z (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CTSZ per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CTSZ definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.