cathepsin C Plasmide Double Nickase (h): sc-401814-NIC

CTSC codifica la catepsina C, una dipeptidil peptidasi cisteinica lisosomiale che rimuove dipeptidi N-terminali per attivare molte proteasi seriniche dei granuli nelle cellule della linea mieloide. Attraverso il suo ruolo nella processazione proteolitica, la catepsina C influenza le funzioni effettrici dell’immunità innata, la segnalazione infiammatoria e le cascate proteasiche regolate all’interno del compartimento endolisosomiale. L’attività di CTSC è strettamente legata alla biologia di neutrofili e macrofagi, con effetti su vie coinvolte nella difesa dell’ospite, nel rimodellamento tissutale e nella segnalazione dipendente da proteasi. La disregolazione di CTSC è stata associata a fenotipi immuni e infiammatori e rappresenta un punto di ingresso meccanicistico per studiare le alterazioni delle reti di proteasi in contesti cellulari rilevanti per la malattia.

cathepsin C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTSC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTSC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTSC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTSC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.