CARM1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404087-LAC

CARM1 (arginina metiltransferasi 1 associata ai coattivatori; PRMT4) è una metiltransferasi delle arginine proteiche che catalizza la dimetilazione asimmetrica dell’istone H3 (ad es. H3R17/H3R26) e di molteplici substrati non istonici per regolare la trascrizione, l’elaborazione dell’RNA e l’architettura della cromatina. Attraverso funzioni di coattivatore con recettori nucleari e fattori di trascrizione, CARM1 influenza programmi che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione, le risposte al danno del DNA e l’espressione genica dipendente dai segnali. La metilazione mediata da CARM1 interseca vie epigenetiche che coinvolgono p300/CBP, il rimodellamento della cromatina SWI/SNF e i complessi di elongazione trascrizionale, plasmando una trascrizione specifica di linea cellulare e responsiva allo stress. Un’attività e un’espressione deregolate di CARM1 sono state associate a reti trascrizionali oncogeniche e a un’alterata plasticità cellulare, a sostegno della sua rilevanza negli studi di biologia del cancro e di segnalazione ormono-responsiva.

Le particelle di attivazione lentivirale CARM1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CARM1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CARM1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CARM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CARM1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CARM1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.