CARD 9 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-436080-ACT

Mouse Card9 codifica CARD9, una proteina adattatrice citosolica che collega i recettori di riconoscimento dei pattern alla segnalazione infiammatoria a valle nelle cellule mieloidi. CARD9 è un mediatore chiave delle vie dei recettori lectinici di tipo C e contribuisce all’attivazione dei programmi NF-κB e MAPK che modellano la produzione di citochine, le risposte antimicrobiche e gli stati di differenziamento mieloide. Grazie al suo ruolo nella trasduzione del segnale dell’immunità innata, un’attività alterata di CARD9 è associata a una difesa dell’ospite disfunzionale e a fenotipi legati all’infiammazione nei modelli sperimentali, rendendolo rilevante per studi sulla biologia delle infezioni e sull’omeostasi immunitaria. Card9 è quindi spesso utilizzato per interrogare la logica di segnalazione prossimale al recettore e gli output trascrizionali in macrofagi, cellule dendritiche e cellule della linea neutrofila.

CARD 9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Card9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CARD 9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Card9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Card9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CARD 9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Card9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CARD 9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CARD 9 nelle cellule tumorali con espressione di Card9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.