CaM III Plasmide Double Nickase (h): sc-400953-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CaM III Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CaM III Double Nickase Plasmid (h) e il CaM III Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CALM3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CaM III Plasmide Double Nickase (h) | sc-400953-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CaM III Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400953-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **CALM3** codifica la **calmodulina III (CaM III)**, un sensore del Ca2+ espresso in modo ubiquitario che si lega a numerosi bersagli per convertire segnali di calcio transitori in risposte cellulari coordinate. CaM III regola processi chiave, tra cui la segnalazione mediata da CaMK e calcineurina/NFAT, il metabolismo dei nucleotidi ciclici e il gating dei canali ionici, influenzando così l’accoppiamento eccitazione–contrazione, l’attività sinaptica, la secrezione e la progressione del ciclo cellulare. Attraverso la modulazione della fosforilazione e di programmi trascrizionali, le vie dipendenti dalla calmodulina plasmano la funzione mitocondriale e le risposte allo stress e sono spesso investigate in studi sull’aritmogenesi, su fenotipi neuroevolutivi e sulla segnalazione proliferativa. Un’alterata gestione del calcio e la disfunzione della rete della calmodulina sono quindi rilevanti per modelli meccanicistici di malattie cardiovascolari e neurologiche e per la mappatura delle vie di segnalazione in diversi tipi cellulari.
CaM III Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CALM3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CALM3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CALM3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CALM3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.