Calpain 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400929-NIC

Il gene umano **CAPN1** codifica la calpaina 1, una proteasi cisteinica calcio-dipendente che esegue una proteolisi limitata di proteine del citoscheletro e della segnalazione per modulare adesione, migrazione, rimodellamento di membrana e funzione sinaptica. L’attività della calpaina 1 è strettamente controllata dalle dinamiche intracellulari di Ca²⁺ e dal suo inibitore endogeno calpastatina, collegando CAPN1 alla trasduzione del segnale regolata dal Ca²⁺, al turnover delle adesioni focali e alle vie della proteostasi. Una deregolazione del clivaggio mediato dalle calpaine è stata associata a risposte di danno neuronale, processi neurodegenerativi e alterazioni dell’omeostasi muscolare e del citoscheletro, rendendo CAPN1 un nodo rilevante per lo studio del rimodellamento dipendente dallo stress e dei programmi di sopravvivenza cellulare. La perturbazione di CAPN1 può inoltre influenzare reti di fosforilazione a valle ed eventi di processamento proteolitico che plasmano le cascate di segnalazione infiammatoria e apoptotica.

Calpain 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAPN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAPN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAPN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAPN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.