Calpain 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400929-NIC

O CAPN1 humano codifica a calpaína 1, uma protease cisteína dependente de cálcio que realiza proteólise limitada de proteínas do citoesqueleto e de sinalização para modular adesão, migração, remodelamento de membrana e função sináptica. A atividade da calpaína 1 é rigidamente controlada pela dinâmica intracelular de Ca²⁺ e por seu inibidor endógeno, a calpastatina, conectando o CAPN1 à transdução de sinal regulada por Ca²⁺, à renovação de adesões focais e a vias de proteostase. A clivagem mediada por calpaínas, quando desregulada, tem sido associada a respostas de lesão neuronal, processos neurodegenerativos e alterações na homeostase muscular e do citoesqueleto, tornando o CAPN1 um ponto relevante para estudar remodelamento dependente de estresse e programas de sobrevivência celular. A perturbação de CAPN1 também pode influenciar redes de fosforilação a jusante e eventos de processamento proteolítico que moldam cascatas de sinalização inflamatória e apoptótica.

Calpain 1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CAPN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CAPN1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CAPN1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CAPN1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.