Calnexin Plasmide Double Nickase (h): sc-400154-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Calnexin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Calnexin Double Nickase Plasmid (h) e il Calnexin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CANX. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Calnexin Antibody (AF18): sc-23954
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Calnexin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400154-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calnexin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400154-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano CANX codifica la calnexina, uno chaperone lectinico di membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che si lega ai glicani N‑legati monoglucosilati per promuovere il ripiegamento e il controllo qualità delle glicoproteine nascenti. La calnexina opera nel ciclo calnexina/calreticulina insieme a ERp57 per coordinare la formazione dei ponti disolfuro, la ritenzione dei substrati mal ripiegati e le decisioni di traffico nella via secretoria. Attraverso il suo ruolo nella proteostasi del RE, CANX si interseca con la risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR), la degradazione associata al RE (ER-associated degradation, ERAD) e la segnalazione dello stress cellulare, che possono rimodellare la presentazione dell’antigene e i programmi di sopravvivenza cellulare. Un ripiegamento dipendente dalla calnexina deregolato e lo stress del RE sono spesso studiati nel contesto di patologie da misfolding proteico, infiammazione metabolica e richieste secretorie oncogeniche, rendendo CANX un nodo funzionale per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione.
Calnexin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CANX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CANX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CANX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CANX interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.