Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Calgranulin B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400801
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Calgranulin B Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Calgranulin B, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Calgranulin B Antibody (B-5): sc-376772
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Calgranulin B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400801 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
S100A9 codifica la calgranulina B, una proteina della famiglia S100 legante il calcio che forma eterodimeri con S100A8 ed è espressa in abbondanza nei neutrofili e nei monociti infiammatori. La calgranulina B regola la segnalazione dell’immunità innata e il traffico dei leucociti attraverso interazioni con recettori di riconoscimento di pattern quali TLR4 e RAGE, amplificando programmi di citochine e chemochine guidati da NF-κB/MAPK. Contribuisce alle risposte antimicrobiche, alla regolazione dello stress ossidativo e all’attivazione delle cellule mieloidi, ed è spesso studiata come marcatore e mediatore dell’infiammazione acuta e cronica. Un’espressione deregolata di S100A9 è stata associata a patologie infiammatorie e a programmi mieloidi correlati al cancro, inclusi il reclutamento e la polarizzazione funzionale di popolazioni mieloidi soppressive nel microambiente tumorale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Calgranulin B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene S100A9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del S100A9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto S100A9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Calgranulin B.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di S100A9 per lo studio della segnalazione di Calgranulin B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni S100A9 critici per la funzione di Calgranulin B
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di S100A9 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Calgranulin B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Calgranulin B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus S100A9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Calgranulin B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Calgranulin B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia S100A9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio S100A9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.