Cacna2d2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425312

Panoramica

Cacna2d2 codifica la subunità ausiliaria α2δ-2 dei canali del calcio voltaggio-dipendenti, un regolatore chiave del traffico dei canali, della loro espressione in membrana e delle proprietà biofisiche che determinano l’ingresso di calcio durante l’eccitabilità neuronale e la trasmissione sinaptica. Modulando la funzione dei canali CaV, CACNA2D2 influenza la segnalazione dipendente dall’attività, il rilascio di neurotrasmettitori e i programmi di espressione genica calcio-dipendenti che incidono sullo sviluppo dei circuiti e sulla plasticità. Alterazioni genetiche e funzionali delle subunità α2δ sono state associate a fenotipi neurologici e del neurosviluppo, con Cacna2d2 particolarmente legato alla funzione cerebellare e ai circuiti della coordinazione motoria. Queste caratteristiche rendono Cacna2d2 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi accessori dei canali del calcio in neurobiologia e in modelli di malattia focalizzati sull’elettrofisiologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cacna2d2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cacna2d2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cacna2d2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cacna2d2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cacna2d2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cacna2d2 per lo studio della segnalazione di Cacna2d2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cacna2d2 critici per la funzione di Cacna2d2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cacna2d2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cacna2d2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Cacna2d2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cacna2d2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cacna2d2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Cacna2d2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cacna2d2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cacna2d2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.