C1q-B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404309-ACT

C1QB codifica la catena B del componente del complemento C1q, una subunità di riconoscimento della via classica del complemento che si lega ai complessi immuni e a strutture proprie alterate per avviare l’attivazione del complemento. C1q contribuisce all’opsonizzazione, alla clearance fagocitica e alla modulazione della segnalazione infiammatoria, collegando l’immunità innata all’omeostasi tissutale. Nelle cellule mieloidi e nei macrofagi residenti nei tessuti, i processi associati a C1q intersecano le reti citochiniche, la rimozione di detriti sinaptici e apoptotici e le interazioni con la matrice extracellulare. Un’espressione deregolata di C1q/C1QB è stata associata a fenotipi infiammatori e autoimmuni ed è stata studiata in contesti quali neuroinfiammazione, infezione e rimodellamento immunitario associato ai tumori.

C1q-B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C1QB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C1q-B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C1QB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C1QB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C1q-B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C1QB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C1q-B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C1q-B nelle cellule tumorali con espressione di C1QB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.