C1q-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404309-ACT

C1QB codifica a cadeia B do componente do complemento C1q, uma subunidade de reconhecimento da via clássica do complemento que se liga a complexos imunes e a estruturas próprias alteradas para iniciar a ativação do complemento. O C1q contribui para a opsonização, a depuração por fagocitose e a modulação da sinalização inflamatória, conectando a imunidade inata à homeostase tecidual. Em células mieloides e macrófagos residentes em tecidos, processos associados ao C1q intersectam redes de citocinas, a remoção de detritos sinápticos e apoptóticos e interações com a matriz extracelular. A expressão desregulada de C1q/C1QB tem sido associada a fenótipos inflamatórios e autoimunes e tem sido investigada em contextos que incluem neuroinflamação, infecção e remodelamento imune associado a tumores.

C1q-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1QB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C1q-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1QB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1QB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C1q-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1QB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C1q-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C1q-B em células tumorais com expressão de C1QB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.