C12orf57 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408545-ACT

C12orf57 codifica una piccola proteina umana poco caratterizzata, che è stata collegata all’omeostasi cellulare di base; evidenze emergenti ne suggeriscono inoltre un possibile ruolo nello sviluppo neuronale e nei processi di risposta allo stress. Sebbene i suoi partner molecolari e la collocazione nelle vie di segnalazione siano ancora oggetto di studio, alterazioni del dosaggio di C12orf57 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e a presentazioni cliniche sindromiche, a supporto della necessità di una corretta regolazione del gene nei tessuti differenziati. Il controllo trascrizionale di C12orf57 potrebbe intersecarsi con programmi più ampi che governano le decisioni di destino cellulare, la proteostasi e la dinamica della segnalazione intracellulare. Queste caratteristiche rendono C12orf57 un locus utile per indagare come cambiamenti sottili dell’espressione influenzino fenotipi cellulari rilevanti per la biologia neurologica e dello sviluppo.

C12orf57 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C12orf57 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C12orf57 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C12orf57 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C12orf57, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C12orf57. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C12orf57 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C12orf57 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C12orf57 nelle cellule tumorali con espressione di C12orf57 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.