C/EBP α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400195

Panoramica

CEBPA codifica il fattore di trascrizione C/EBPα, una proteina con motivo basic leucine zipper che si lega agli elementi CCAAT/enhancer per coordinare programmi di espressione genica specifici di linea. È un regolatore chiave della differenziazione ematopoietica e mieloide, integrando i segnali con il controllo trascrizionale dell’arresto del ciclo cellulare, dell’omeostasi metabolica e della maturazione granulocitica. C/EBPα interagisce con vie che governano il rimodellamento della cromatina e con reti trascrizionali che coinvolgono la segnalazione citochinica e altri regolatori mieloidi, plasmando lo sviluppo dell’immunità innata. La disregolazione dell’espressione o della funzione di CEBPA è associata a stati di differenziazione alterati e a fenotipi proliferativi, rendendolo ampiamente studiato in contesti quali la biologia delle neoplasie ematologiche e le decisioni di destino delle cellule staminali/progenitrici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CEBPA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CEBPA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CEBPA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C/EBP α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CEBPA per lo studio della segnalazione di C/EBP α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CEBPA critici per la funzione di C/EBP α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CEBPA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C/EBP α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C/EBP α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CEBPA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C/EBP α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C/EBP α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CEBPA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CEBPA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.