BRWD1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-430062-ACT

Brwd1 codifica la proteina murina BRWD1 contenente bromodomini e domini a ripetizione WD, un fattore nucleare associato alla cromatina che riconosce gli istoni acetilati e sostiene la regolazione epigenetica della trascrizione. BRWD1 svolge ruoli consolidati nello sviluppo delle cellule germinali e nella progressione meiotica e contribuisce a programmi di espressione genica specifici di linea nelle cellule immunitarie, inclusa la differenziazione delle cellule B. Attraverso i suoi bromodomini e le ripetizioni WD, BRWD1 è collegata al rimodellamento della cromatina, al controllo trascrizionale e alla regolazione genica coordinata con il ciclo cellulare. La deregolazione degli stati della cromatina associati a BRWD1 è rilevante negli studi su difetti dello sviluppo, fenotipi di infertilità e anomalie del sistema immunitario in modelli murini.

BRWD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Brwd1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BRWD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Brwd1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Brwd1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BRWD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Brwd1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BRWD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BRWD1 nelle cellule tumorali con espressione di Brwd1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.