BRDG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425307

Panoramica

STAP1 (BRDG1) è una proteina adattatrice espressa nelle linee cellulari ematopoietiche e del sistema immunitario, che coordina la segnalazione intracellulare a valle dei recettori di superficie. Nei modelli murini, BRDG1 è stata collegata a vie associate al recettore delle cellule B e a una segnalazione dipendente da tirosin-chinasi, influenzando cascate di fosforilazione e output trascrizionali che modellano l’attivazione e la differenziazione immunitaria. Attraverso interazioni mediate da domini di legame modulari, BRDG1 può influire sull’integrazione dei segnali, sull’assemblaggio di complessi proteici e sui programmi di espressione genica a valle. La disregolazione delle reti di segnalazione guidate da proteine adattatrici è rilevante per fenotipi infiammatori e per i meccanismi delle patologie ematologiche, rendendo Stap1 un bersaglio utile per studiare la robustezza della segnalazione immunitaria e il ricollegamento (rewiring) delle vie di segnale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BRDG1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stap1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stap1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stap1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BRDG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stap1 per lo studio della segnalazione di BRDG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Stap1 critici per la funzione di BRDG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stap1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BRDG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BRDG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stap1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BRDG1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BRDG1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stap1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stap1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.