BRCA1 Plasmide Double Nickase (r): sc-437320-NIC
- Specie Target: rat
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BRCA1 Plasmide Double Nickase (r) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BRCA1 Double Nickase Plasmid (r) e il BRCA1 Double Nickase Plasmid (r2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira . Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BRCA1 Antibody (287.17): sc-135732
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BRCA1 Plasmide Double Nickase (r) | sc-437320-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRCA1 Plasmide Double Nickase (r2) | sc-437320-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRCA1 codifica un oncosoppressore multifunzionale che coordina il mantenimento del genoma regolando la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA tramite ricombinazione omologa, la protezione delle forcelle di replicazione e il controllo dei checkpoint del ciclo cellulare. Nelle cellule di ratto, BRCA1 agisce all’interno dell’asse BRCA1–PALB2–BRCA2 per favorire il caricamento di RAD51 e partecipa alle vie di segnalazione del danno al DNA governate dalle chinasi ATM/ATR. La perdita o l’alterazione di BRCA1 compromette i processi di riparazione associati alla cromatina, aumenta l’instabilità genomica e rende le cellule più sensibili allo stress replicativo. Questi meccanismi rendono BRCA1 un nodo centrale per studiare, in modelli murini, la scelta delle vie di riparazione del DNA, la fedeltà mitotica e i fenotipi di integrità genomica rilevanti per il cancro.
BRCA1 Il plasmide Double Nickase (r) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus nelle linee cellulari rat. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di . Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di . Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.