bradykinin Plasmide Double Nickase (h): sc-402422-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- bradykinin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il bradykinin Double Nickase Plasmid (h) e il bradykinin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KNG1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: bradykinin Antibody (4A1): sc-293304
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
bradykinin Plasmide Double Nickase (h) | sc-402422-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
bradykinin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402422-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **KNG1** codifica il chininogeno ad alto peso molecolare, una proteina plasmatica multifunzionale che funge da precursore per la generazione di bradichinina durante l’attivazione del sistema di contatto. Il rilascio proteolitico della bradichinina da parte delle callicreine attiva i recettori della bradichinina, regolando il tono vascolare, la permeabilità endoteliale, la trasmissione del dolore e la produzione di mediatori infiammatori, collegando così **KNG1** al crosstalk tra coagulazione e infiammazione all’interno del sistema callicreina–chinina. L’attività di **KNG1** interagisce con la coagulazione intrinseca e con processi correlati al complemento tramite interazioni con il fattore XII, la pre-callicreina e partner di legame di superficie sull’endotelio. La disregolazione della produzione o della segnalazione della bradichinina è implicata in stati infiammatori predisponenti all’edema e nella disfunzione vascolare, rendendo **KNG1** un nodo rilevante per studi meccanicistici sulle cascate di proteasi plasmatiche.
bradykinin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KNG1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KNG1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KNG1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KNG1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.