Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BPGM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405810
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BPGM Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico BPGM, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BPGM Antibody (C-4): sc-373819
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BPGM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405810 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La mutasi del bisfosfoglicerato (BPGM) è un enzima arricchito nella linea eritroide che regola i livelli di 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG), un importante effettore allosterico dell’affinità dell’emoglobina per l’ossigeno. Interconvertendo 1,3-bisfosfoglicerato e 2,3-BPG, BPGM collega il flusso glicolitico alla fisiologia della consegna di ossigeno e all’omeostasi metabolica dei globuli rossi. Alterazioni dell’attività di BPGM possono spostare le concentrazioni di 2,3-BPG e modulare l’ossigenazione dei tessuti, rendendolo rilevante per studi sul metabolismo eritrocitario, sull’adattamento all’ipossia e su fenotipi ematologici. Poiché il 2,3-BPG influisce sulla funzione dell’emoglobina senza modificarne l’abbondanza, BPGM è spesso utilizzato per individuare punti di controllo metabolici che influenzano la dinamica di legame dell’ossigeno.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BPGM (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BPGM in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BPGM insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BPGM a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BPGM.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BPGM per lo studio della segnalazione di BPGM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni BPGM critici per la funzione di BPGM
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BPGM per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal BPGM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BPGM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BPGM. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal BPGM Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BPGM (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BPGM per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BPGM definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.