BMPR-IA Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400581-ACT

BMPR1A codifica per il recettore di tipo IA della bone morphogenetic protein (BMPR-IA), un recettore chinasi della serina/treonina che trasduce i segnali dei ligandi BMP per regolare le decisioni sul destino cellulare, la definizione dei pattern tissutali e il controllo omeostatico di proliferazione e differenziamento. In seguito al legame del ligando insieme ai recettori BMP di tipo II, BMPR-IA attiva la segnalazione canonica mediata da SMAD1/5/9 e interagisce con vie non canoniche MAPK, contribuendo a modellare programmi trascrizionali in diversi tipi cellulari. L’attività di BMPR1A è centrale nei processi di sviluppo e rigenerazione, in particolare nelle linee epiteliali e mesenchimali, e contribuisce a una regolazione dipendente dal contesto del comportamento delle cellule staminali/progenitrici. Un’alterazione della segnalazione BMP/BMPR1A è stata implicata in anomalie congenite e in fenotipi correlati al cancro attraverso modifiche del differenziamento e del controllo della crescita.

BMPR-IA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BMPR1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BMPR-IA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BMPR1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BMPR1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BMPR-IA. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BMPR1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BMPR-IA nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BMPR-IA nelle cellule tumorali con espressione di BMPR1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.