BMP-8B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404893-ACT

Il gene umano **BMP8B** codifica la proteina morfogenetica ossea 8B (BMP-8B), un ligando secreto della superfamiglia del TGF-β che segnala attraverso i recettori BMP di tipo I/II con attività chinasi serina/treonina, attivando programmi trascrizionali dipendenti da SMAD1/5/8. BMP-8B contribuisce alla regolazione delle decisioni di destino cellulare, inclusa la differenziazione osteogenica e adipogenica, la patterning dello sviluppo e il rimodellamento tissutale, attraverso un controllo coordinato della proliferazione e della dinamica della matrice extracellulare. All’interno delle reti di segnalazione della via BMP/TGF-β, l’attività di BMP8B può influenzare il crosstalk con le vie MAPK e WNT, modellando output trascrizionali specifici del contesto. Alterazioni della segnalazione BMP e la disregolazione di BMP8B sono state implicate in disturbi della biologia scheletrica, della fisiologia riproduttiva e della regolazione metabolica, supportandone l’utilizzo come nodo meccanicistico per studi focalizzati sulle vie di segnalazione.

BMP-8B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BMP8B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BMP-8B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BMP8B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BMP8B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BMP-8B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BMP8B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BMP-8B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BMP-8B nelle cellule tumorali con espressione di BMP8B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.