BMP-8B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404893-ACT

O BMP8B humano codifica a proteína morfogenética óssea 8B (BMP-8B), um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza por meio de receptores BMP tipo I/II com atividade de quinase de serina/treonina para ativar programas transcricionais dependentes de SMAD1/5/8. A BMP-8B contribui para a regulação de decisões de destino celular, incluindo a diferenciação osteogênica e adipogênica, o padrão de desenvolvimento e a remodelação tecidual, por meio do controle coordenado da proliferação e da dinâmica da matriz extracelular. Dentro das redes de vias BMP/TGF-β, a atividade de BMP8B pode influenciar a comunicação cruzada com as vias de sinalização MAPK e WNT, moldando saídas transcricionais específicas do contexto. Alterações na sinalização de BMP e a desregulação de BMP8B têm sido implicadas em distúrbios da biologia esquelética, da fisiologia reprodutiva e da regulação metabólica, apoiando seu uso como um nó mecanístico para estudos focados em vias.

BMP-8B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMP8B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-8B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMP8B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMP8B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-8B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMP8B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-8B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-8B em células tumorais com expressão de BMP8B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.