BMCP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-422996-LAC-2

Nel topo, Slc25a14 codifica la brain mitochondrial carrier protein 1 (BMCP1), un trasportatore della membrana mitocondriale interna appartenente alla famiglia SLC25, coinvolto nella regolazione della perdita di protoni e dell’efficienza di accoppiamento mitocondriale. L’attività di BMCP1 influenza la fosforilazione ossidativa, il potenziale di membrana, la produzione di ATP e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno, contribuendo così a modulare le risposte dei neuroni e dei tessuti metabolicamente attivi alle richieste energetiche e allo stress. Alterazioni della funzione di Slc25a14 sono state studiate nel contesto della disfunzione mitocondriale e dello squilibrio redox, rilevanti per la neurodegenerazione e per fenotipi metabolici. L’editing genetico di Slc25a14 in modelli murini supporta la ricerca meccanicistica sulla bioenergetica mitocondriale, sulla segnalazione adattativa allo stress e sulle relazioni genotipo–fenotipo nelle vie dei trasportatori mitocondriali.

Le particelle di attivazione lentivirale BMCP1 (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Slc25a14 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BMCP1 (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Slc25a14, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BMCP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Slc25a14 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.