BIGM103 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426620

Panoramica

Slc39a8 codifica un trasportatore di ioni metallici della famiglia ZIP (BIGM103) che media principalmente l’assorbimento cellulare di cationi bivalenti, con una particolare enfasi sull’omeostasi del manganese. Controllando la disponibilità intracellulare di Mn, SLC39A8 influenza l’attività degli enzimi Mn-dipendenti e sostiene processi quali la glicosilazione, il metabolismo mitocondriale e l’equilibrio redox. Un’alterazione della funzione di SLC39A8 è stata associata a una gestione disfunzionale dei metalli e a effetti a valle sulla segnalazione infiammatoria e sulle vie metaboliche, rendendolo rilevante per lo studio delle interazioni nutriente–gene e dei fenotipi cellulari sensibili allo stress. Nei modelli murini, Slc39a8 viene spesso studiato nel contesto della biologia dei trasportatori, delle risposte immunitarie innate e dei tratti legati al metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BIGM103 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc39a8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc39a8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc39a8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BIGM103.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc39a8 per lo studio della segnalazione di BIGM103, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc39a8 critici per la funzione di BIGM103
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc39a8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BIGM103 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BIGM103 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc39a8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BIGM103 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BIGM103 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc39a8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc39a8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.