beta Synuclein Plasmide Double Nickase (h): sc-400894-NIC

Il gene umano **SNCB** codifica la **beta-sinucleina**, una proteina citosolica presinaptica arricchita nei neuroni, dove contribuisce al ciclo delle vescicole sinaptiche, alle interazioni tra proteine associate alla membrana e alla modulazione del rilascio di neurotrasmettitori. In quanto membro della famiglia delle sinucleine, interagisce con reti di proteostasi che includono il ripiegamento mediato da chaperoni, il turnover tramite ubiquitina–proteasoma e le vie autofagia–lisosoma, che influenzano le dinamiche di aggregazione proteica. La beta-sinucleina è studiata nel contesto della vulnerabilità neuronale e delle risposte allo stress, con rilevanza per i meccanismi delle malattie neurodegenerative che coinvolgono disfunzione sinaptica e gestione delle proteine mal ripiegate. La sua espressione e le sue interazioni biochimiche forniscono un quadro per analizzare come l’omeostasi presinaptica influenzi i circuiti neuronali e i percorsi di sopravvivenza cellulare.

beta Synuclein Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SNCB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SNCB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SNCB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SNCB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.