beta Actin CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-400000-ACT-2

ヒトACTBは、細胞骨格を構成する高度に保存されたタンパク質であるβアクチンをコードしており、βアクチンは重合してマイクロフィラメントを形成することで、細胞形状の維持、極性、収縮性、運動性を駆動する。βアクチンの動態は、接着斑のターンオーバー、メカノトランスダクション、細胞質分裂、小胞輸送を協調させるアクチン細胞骨格リモデリング経路の中核であり、さらにアクチン依存的な核内プロセスを介して転写制御にも寄与する。ACTB自体やその相互作用ネットワークの攪乱は、発生異常や、がん細胞の浸潤・転移で観察される細胞骨格組織の変化と関連しており、遺伝子型―表現型関係を研究するうえでの重要性を示している。ACTBを標的とした遺伝子編集や機能ゲノミクスのワークフローは、アクチン制御シグナル伝達の解明、ライブセルイメージングにおける細胞骨格表現型の定量、ならびに経路攪乱研究のための堅牢な参照コンテキストの確立に広く用いられている。

beta Actin CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACTBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

beta Actin CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における ACTB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACTB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性beta Actinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACTB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbeta Actin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACTB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbeta Actin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。