BAT2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409707-ACT

PRRC2A codifica la proteina umana BAT2, un grande fattore legante l’RNA ricco di prolina implicato nella regolazione genica post-trascrizionale, inclusi la stabilità dell’mRNA e il controllo della traduzione. BAT2 è stata collegata al metabolismo dell’RNA in risposta allo stress e a una più ampia regolazione dei programmi di espressione genica che influenzano la crescita e la differenziazione cellulare. Variazioni genetiche ed espressione deregolata nel locus PRRC2A/BAT2 sono state riportate in tratti correlati all’immunità e in regioni genomiche associate al cancro, a supporto della sua rilevanza per vie che modellano la segnalazione infiammatoria e la biologia tumorale. Queste caratteristiche rendono PRRC2A un bersaglio utile per analizzare le reti di regolazione dell’RNA e i loro effetti a valle sul fenotipo cellulare.

BAT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRRC2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BAT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRRC2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRRC2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BAT2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRRC2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BAT2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BAT2 nelle cellule tumorali con espressione di PRRC2A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.