BAP31 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402421-ACT

BCAP31 codifica a proteína humana BAP31, uma chaperona de membrana do retículo endoplasmático (RE) com múltiplas passagens transmembrana, que regula o tráfego e o controle de qualidade de proteínas de membrana recém-sintetizadas. A BAP31 participa do transporte do RE para o Golgi e da degradação associada ao RE (ERAD), conectando o fluxo da via secretória à sinalização da resposta a proteínas mal dobradas e à manutenção da proteostase. Ela também se relaciona com a apoptose e a homeostase de cálcio em sítios de contato RE–mitocôndria, influenciando a sensibilidade celular ao estresse. A disfunção desregulada de BCAP31/BAP31 tem sido implicada em alterações no processamento de proteínas e em programas de sobrevivência celular relevantes para contextos do neurodesenvolvimento e da oncogênese.

BAP31 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCAP31 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAP31 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCAP31 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCAP31, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAP31. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCAP31 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAP31 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAP31 em células tumorais com expressão de BCAP31 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.