B7-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419575

Panoramica

Cd86 codifica per il ligando co-stimolatorio B7-2 (CD86), una glicoproteina transmembrana di tipo I espressa sulle cellule presentanti l’antigene, come cellule dendritiche, macrofagi e linfociti B. B7-2 interagisce con CD28 e CTLA-4 sui linfociti T per modulare le soglie di attivazione, la produzione di citochine e la tolleranza periferica, integrandosi con la segnalazione del TCR, i programmi trascrizionali mediati da NF-κB/AP-1 e la regolazione dei checkpoint immunitari. La sua espressione inducibile durante il riconoscimento dell’immunità innata collega i segnali infiammatori all’innesco dell’immunità adattativa e alle risposte del centro germinativo. Un’attività di CD86 deregolata è implicata in modelli di autoimmunità, infiammazione cronica, risposte al trapianto ed evasione immunitaria tumorale, rendendolo un nodo chiave per la ricerca in immunologia e immuno-oncologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO B7-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd86 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd86 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd86 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina B7-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd86 per lo studio della segnalazione di B7-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd86 critici per la funzione di B7-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd86 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal B7-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal B7-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd86. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal B7-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR B7-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd86 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd86 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.