ATR Plasmide Double Nickase (h): sc-400335-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATR Double Nickase Plasmid (h) e il ATR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATR Antibody (C-1): sc-515173
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATR Plasmide Double Nickase (h) | sc-400335-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400335-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATR codifica una chinasi proteica serina/treonina che funge da regolatore principale della risposta allo stress replicativo e della segnalazione del danno al DNA. Attivata principalmente dal DNA a singolo filamento rivestito da RPA in corrispondenza di forcelle di replicazione bloccate, ATR fosforila substrati chiave come CHK1 per coordinare il controllo del checkpoint della fase S, la stabilizzazione delle forcelle di replicazione e la soppressione dell’attivazione di nuove origini. Attraverso il crosstalk con la via di ATM e con il macchinario della ricombinazione omologa, ATR preserva l’integrità del genoma durante la replicazione e in risposta a stress genotossici. La deregolazione della segnalazione di ATR e la tolleranza allo stress replicativo sono spesso implicate in fenotipi di instabilità genomica studiati in oncologia e nelle patologie ereditarie dei sistemi di riparazione del DNA.
ATR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.