ATP6E Plasmide Double Nickase (h): sc-404046-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATP6E Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATP6E Double Nickase Plasmid (h) e il ATP6E Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP6V1E1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATP6E Antibody (G-3): sc-514143
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATP6E Plasmide Double Nickase (h) | sc-404046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP6E Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1E1 codifica la subunità E1 (ATP6E) del dominio periferico V1 della H\+-ATPasi vacuolare (V-ATPasi), una ATPasi rotatoria multisubunità che fornisce l’energia per la traslocazione di protoni necessaria ad acidificare endosomi, lisosomi e altri compartimenti intracellulari. Controllando il pH degli organelli, l’attività della V-ATPasi regola l’endocitosi mediata da recettori, la degradazione lisosomiale, l’autofagia, la processazione dell’antigene e il traffico vescicolare, con effetti a valle sul sensing dei nutrienti e sulle vie di segnalazione accoppiate al trasporto di membrana. Alterazioni della composizione o della funzione delle subunità della V-ATPasi possono compromettere l’omeostasi cellulare e sono state associate a disordini ereditari dell’acidificazione e a fenotipi di neuro-sviluppo, oltre che a modifiche della proteostasi e delle risposte allo stress metabolico. ATP6V1E1 rappresenta quindi un locus utile per studiare la regolazione, dipendente dal pH, della dinamica di membrana e della funzione degli organelli nelle cellule umane.
ATP6E Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP6V1E1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP6V1E1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP6V1E1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP6V1E1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.