ATP5F1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405710-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATP5F1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATP5F1 Double Nickase Plasmid (h) e il ATP5F1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP5F1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATP5F1 Antibody (C-12): sc-514419
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATP5F1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405710-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP5F1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405710-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP5F1 codifica il nucleo catalitico dell’ATP sintasi mitocondriale F1F0 (Complesso V), un enzima chiave che accoppia la fosforilazione ossidativa alla produzione di ATP attraverso la membrana mitocondriale interna. Convertendo la forza proton-motrice in ATP cellulare, ATP5F1 sostiene processi dipendenti dall’energia, tra cui l’omeostasi ionica, la biosintesi e l’adattamento allo stress, e si integra con l’attività della catena di trasporto degli elettroni e con il controllo del potenziale di membrana mitocondriale. L’alterazione della funzione dell’ATP sintasi è associata a disfunzione mitocondriale, a una gestione alterata delle specie reattive dell’ossigeno e a una riprogrammazione metabolica che può influenzare la sopravvivenza e la proliferazione cellulare. In quanto nodo centrale della bioenergetica, ATP5F1 è spesso studiato nel contesto di fenotipi neuromuscolari e neurodegenerativi, nonché del contributo mitocondriale al metabolismo delle cellule tumorali.
ATP5F1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP5F1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP5F1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP5F1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP5F1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.