ATP5B Plasmide Double Nickase (h): sc-401009-NIC

ATP5B codifica la subunità β dell’ATP sintasi mitocondriale (Complesso V), un componente catalitico fondamentale che accoppia il flusso di protoni attraverso la membrana mitocondriale interna alla produzione di ATP tramite fosforilazione ossidativa. Regolando lo stato energetico cellulare, ATP5B influenza il potenziale di membrana mitocondriale, l’equilibrio redox e processi ATP-dipendenti quali l’omeostasi ionica, la sintesi proteica e le risposte allo stress. Un’attività disregolata dell’ATP sintasi e una più ampia disfunzione mitocondriale sono associate ad alterazioni della bioenergetica e della gestione delle specie reattive dell’ossigeno osservate in diverse patologie umane, incluse manifestazioni neuromuscolari e neurodegenerative. Essendo un prodotto genico mitocondriale altamente conservato, ATP5B è spesso impiegato per studiare il metabolismo mitocondriale e il suo crosstalk con l’apoptosi e la segnalazione integrata dello stress.

ATP5B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP5B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP5B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP5B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP5B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.