ASXL1 Plasmide Double Nickase (m): sc-432808-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASXL1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASXL1 Double Nickase Plasmid (m) e il ASXL1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Asxl1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ASXL1 Antibody (6E2): sc-293204
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASXL1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-432808-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASXL1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432808-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Asxl1 codifica ASXL1, un regolatore associato alla cromatina che coopera con i complessi del gruppo Polycomb e Trithorax per modellare gli stati epigenetici e i programmi trascrizionali nelle cellule di topo. ASXL1 influenza la dinamica delle modifiche istoniche, incluse vie legate alla metilazione di H3K27 e a un più ampio rimodellamento della cromatina, incidendo così sulla specificazione di linea, sulla proliferazione e sulla differenziazione. L’alterazione del controllo epigenetico mediato da ASXL1 modifica le reti di espressione genica coinvolte nello sviluppo ematopoietico e nel mantenimento delle cellule staminali. La disregolazione di ASXL1 è ampiamente studiata nel contesto dei meccanismi associati alle neoplasie mieloidi e della biologia dello sviluppo, a supporto della sua rilevanza per modellare difetti trascrizionali e della cromatina legati alla malattia.
ASXL1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Asxl1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Asxl1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Asxl1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Asxl1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.