ASS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401923-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASS1 Double Nickase Plasmid (h) e il ASS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ASS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ASS1 Antibody (E-12): sc-365475
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401923-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASS1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401923-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ASS1 umano (argininosuccinato sintasi 1) catalizza la condensazione ATP-dipendente di citrullina e aspartato per formare argininosuccinato, un passaggio chiave del ciclo dell’urea che consente la detossificazione dell’ammoniaca e поддержa l’omeostasi sistemica dell’azoto. Oltre all’ureagenesi epatica, l’attività di ASS1 influenza la disponibilità intracellulare di arginina, collegando il flusso del ciclo dell’urea alla biosintesi dell’ossido nitrico e, più in generale, al metabolismo degli amminoacidi. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ASS1 sono associate a disturbi del ciclo dell’urea, come la citrullinemia di tipo I, e sono state osservate anche in contesti tumorali in cui si studiano l’auxotrofia per l’arginina e la riprogrammazione metabolica. Queste caratteristiche rendono ASS1 un nodo utile per lo studio della gestione dell’azoto, dell’accoppiamento metabolico mitocondrio–citosol e delle risposte allo stress dovute alla limitazione di amminoacidi.
ASS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ASS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ASS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ASS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ASS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.