ASH1L Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431404-ACT

O gene murino **Ash1l** codifica a **ASH1L**, uma metiltransferase de lisina em histonas com domínio SET que atua como reguladora do grupo Trithorax da acessibilidade da cromatina e da memória transcricional durante o desenvolvimento. A atividade de ASH1L está ligada à metilação de H3K36 e ao antagonismo da repressão mediada por Polycomb, sustentando programas de expressão gênica que controlam a especificação do destino celular, a diferenciação neuronal e a função sináptica. Por meio desses mecanismos epigenéticos, ASH1L contribui para a regulação de redes transcricionais e de módulos de processamento de RNA importantes para o comprometimento de linhagem e a maturação. A desregulação de ASH1L tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a estados alterados de expressão gênica relevantes para pesquisas sobre transtorno do espectro do autismo e deficiência intelectual.

ASH1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ash1l sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ASH1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ash1l em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ash1l, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ASH1L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ash1l nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ASH1L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ASH1L em células tumorais com expressão de Ash1l silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.