ASH1L Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431404-ACT

Il gene murino **Ash1l** codifica **ASH1L**, una metiltransferasi delle lisine istoniche con dominio SET che agisce come regolatore del gruppo Trithorax dell’accessibilità della cromatina e della memoria trascrizionale durante lo sviluppo. L’attività di ASH1L è collegata alla metilazione di H3K36 e all’antagonismo della repressione mediata da Polycomb, sostenendo programmi di espressione genica che governano la specificazione del destino cellulare, la differenziazione neuronale e la funzione sinaptica. Attraverso questi meccanismi epigenetici, ASH1L contribuisce alla regolazione di reti trascrizionali e di moduli di processamento dell’RNA importanti per l’impegno di linea e la maturazione. La deregolazione di ASH1L è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e a stati di espressione genica alterati rilevanti per la ricerca sui disturbi dello spettro autistico e sulla disabilità intellettiva.

ASH1L Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ash1l senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ASH1L Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ash1l nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ash1l, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ASH1L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ash1l nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ASH1L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ASH1L nelle cellule tumorali con espressione di Ash1l silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.