ASH1L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402901-ACT

ASH1L (absent, small, or homeotic discs 1-like) codifica una metiltransferasi nucleare delle lisine istoniche che deposita la metilazione di H3K36 per sostenere l’elongazione trascrizionale e mantenere programmi di espressione genica specifici del tipo cellulare. Attraverso i suoi domini di lettura della cromatina e quelli catalitici, ASH1L contribuisce a bilanciare la repressione e l’attivazione mediate da Polycomb nei loci dello sviluppo, influenzando processi quali la differenziazione neuronale e l’impegno di linea cellulare. Il controllo epigenetico regolato da ASH1L si interseca con vie che governano il rimodellamento della cromatina, l’attività degli enhancer e la fedeltà della trascrizione. La variabilità genetica o la disregolazione di ASH1L è stata associata a fenotipi neurosviluppativi e a reti di regolazione genica alterate, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici della trascrizione guidata dalla cromatina.

ASH1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ASH1L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ASH1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ASH1L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ASH1L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ASH1L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ASH1L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ASH1L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ASH1L nelle cellule tumorali con espressione di ASH1L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.