ASCT2 Plasmide Double Nickase (m): sc-422987-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASCT2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASCT2 Double Nickase Plasmid (m) e il ASCT2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc1a5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASCT2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422987-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene Slc1a5 del topo codifica il trasportatore di amminoacidi neutri ASCT2 (SLC1A5), un carrier sodio-dipendente che media l’assorbimento cellulare e lo scambio di glutammina e di altri piccoli amminoacidi neutri. ASCT2 contribuisce all’omeostasi degli amminoacidi e sostiene le esigenze biosintetiche e bioenergetiche collegando la disponibilità di glutammina a vie quali la segnalazione di mTORC1, il controllo redox tramite la sintesi di glutatione e l’anaplerosi mitocondriale. Nel sistema immunitario e nei tipi cellulari a rapida proliferazione, l’attività di ASCT2 influenza i programmi di attivazione e la riprogrammazione metabolica che accoppiano il trasporto di nutrienti a crescita e risposte allo stress. Un’espressione o una funzione deregolata di SLC1A5 è stata associata a dipendenze nutrizionali alterate e a fenotipi metabolici studiati in modelli di biologia del cancro, infiammazione e rimodellamento tissutale.
ASCT2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc1a5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc1a5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc1a5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc1a5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.