ARH2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-433335-ACT

Il gene murino **Adprhl1** codifica **ARH2**, un membro della famiglia delle **ADP-ribosilidrolasi-like**, implicata nella regolazione della dinamica della **mono-ADP-ribosilazione** e dei segnali associati al turnover proteico. Sebbene per alcuni membri della famiglia l’attività enzimatica possa risultare atipica, ARH2 è studiata per il suo contributo alle risposte cellulari allo stress, al controllo metabolico e a processi di segnalazione che intersecano la gestione del danno al DNA e l’omeostasi redox. Nei modelli di biologia cardiaca e muscolare, l’espressione di **Adprhl1** è stata collegata all’organizzazione miofibrillare e a programmi di sviluppo, rendendolo rilevante per lo studio di vie associate alla cardiomiopatia e dei meccanismi di rimodellamento tissutale. Queste proprietà collocano ARH2 come un nodo utile per chiarire come la segnalazione associata all’ADP-ribosio si integri con la fisiologia specifica d’organo.

ARH2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Adprhl1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ARH2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Adprhl1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Adprhl1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ARH2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Adprhl1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ARH2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ARH2 nelle cellule tumorali con espressione di Adprhl1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.