Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ARA70 Plasmide Double Nickase (m): sc-424185-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARA70 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARA70 Double Nickase Plasmid (m) e il ARA70 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ncoa4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARA70 Antibody (C-4): sc-373739
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARA70 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424185-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ncoa4 codifica ARA70, un coattivatore dei recettori nucleari che modula la trascrizione ligando-dipendente interagendo con il recettore degli androgeni e con complessi correlati di recettori nucleari. ARA70 influenza programmi trascrizionali associati alla cromatina che regolano proliferazione, differenziamento e metabolismo cellulare, integrando segnali provenienti dalle vie degli ormoni steroidei e dei co-regolatori. NCOA4 partecipa inoltre all’omeostasi del ferro attraverso la ferritinofagia, collaborando con la macchina autofagica diretta da NCOA4 per convogliare la ferritina ai lisosomi, collegando la biologia dei recettori nucleari all’autofagia e alle risposte allo stress ossidativo. La disregolazione di questi processi è stata associata ad alterazioni della segnalazione ormonale, a una vulnerabilità cellulare dipendente dal ferro e a fenotipi rilevanti in contesti di ricerca sulla biologia del cancro e sulla neurodegenerazione.
ARA70 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ncoa4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ncoa4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ncoa4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ncoa4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.