Aquaporin 2/AQP2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400402-NIC

AQP2 codifica l'acquaporina‑2, un canale dell'acqua regolato dalla vasopressina che media il riassorbimento transcellulare di acqua nelle cellule principali del dotto collettore renale. Il suo traffico verso la membrana apicale è controllato dalla segnalazione cAMP/PKA guidata da AVPR2 e dall'inserimento e recupero da vescicole dipendenti dalla fosforilazione, collegando AQP2 alla polarità epiteliale e all'omeostasi osmotica. Alterazioni dell'espressione, della localizzazione o della funzione di canale di AQP2 sono associate a una ridotta capacità di concentrare le urine e contribuiscono a disturbi dell'equilibrio idrico come il diabete insipido nefrogenico e condizioni di iponatriemia. In quanto proteina di membrana arricchita nel rene, AQP2 è anche utilizzata per studiare il riciclo endosomiale, il controllo qualità delle proteine di membrana e le vie di trasporto regolato dagli ormoni.

Aquaporin 2/AQP2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AQP2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AQP2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AQP2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AQP2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.