Aquaporin 1/AQP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400340-ACT

AQP1 codifica l’acquaporina-1, un canale dell’acqua tetramerico che media un rapido e selettivo flusso transmembrana di acqua e contribuisce all’omeostasi osmotica in molteplici tessuti, inclusi endotelio ed eritrociti. Regolando il volume cellulare, la permeabilità di membrana e il movimento dei fluidi attraverso le barriere capillari, AQP1 influenza processi quali lo scambio di fluidi nel microcircolo, la migrazione cellulare e il comportamento angiogenico in risposta a segnali osmotici e meccanici. Un’alterata espressione di AQP1 è stata associata a uno sbilanciamento della regolazione dei fluidi e a fenotipi correlati all’edema, ed è spesso studiata nel contesto della vascolarizzazione associata ai tumori, dell’infiammazione e della funzione di barriera. Queste caratteristiche rendono AQP1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla biologia del trasporto dell’acqua e sulla regolazione del microambiente in modelli cellulari umani.

Aquaporin 1/AQP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AQP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Aquaporin 1/AQP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AQP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AQP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Aquaporin 1/AQP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AQP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Aquaporin 1/AQP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Aquaporin 1/AQP1 nelle cellule tumorali con espressione di AQP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.