Aquaporin 1/AQP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400340-ACT

AQP1 codifica a aquaporina-1, um canal de água tetramérico que medeia um fluxo transmembranar rápido e seletivo de água e contribui para a homeostase osmótica em múltiplos tecidos, incluindo o endotélio e os eritrócitos. Ao regular o volume celular, a permeabilidade da membrana e o movimento de fluidos através de barreiras capilares, AQP1 influencia processos como a troca de fluidos na microvasculatura, a migração celular e o comportamento angiogênico em resposta a estímulos osmóticos e mecânicos. A expressão alterada de AQP1 tem sido associada a desequilíbrio na regulação de fluidos e a fenótipos relacionados a edema, sendo frequentemente estudada no contexto da vasculatura associada a tumores, da inflamação e da função de barreira. Essas características tornam AQP1 um alvo útil para estudos mecanísticos da biologia do transporte de água e da regulação do microambiente em modelos celulares humanos.

Aquaporin 1/AQP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AQP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Aquaporin 1/AQP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AQP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AQP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Aquaporin 1/AQP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AQP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Aquaporin 1/AQP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Aquaporin 1/AQP1 em células tumorais com expressão de AQP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.